研究大鼠肺间质纤维化的造模方法。
方法：模型组大鼠气管插管灌注不同剂量76、5、342、1
mg/kg体质量的博莱霉素A5-生理盐水，对照组给予等体积生理盐水，观察大鼠生存情况、肺组织病理，并深入研究博莱霉素1
mg/kg体质量组，观察大鼠体质量变化，肺组织病理，检测第14天28天、45天时大鼠肺系数以及血清中转化生长因子和血小板衍生生长因子的含量结果：经多个剂量的研究发现，较大剂量博莱霉素气管插管快速灌注法复制大鼠肺间质纤维化模型死亡率高，1
mg/kg体质量气管内灌注博莱霉素A5-生理盐水可以造成大鼠肺组织纤维化改变。深入研究发现，与假手术组比较，1
mg/kg体质量组大鼠肺组织病理14
d已出现明显的纤维化改变，28
d已形成弥漫性纤维化，45
d时纤维化程度进一步加重。与假手术组比较模型组3、7、14
d体质量降低P关键词肺纤维化模型,动物;
博莱霉素;胡卓伟认为，在肺局部组织的功能完全丧失之前，通过CFX给药治疗，是完全有可能逆转肺组织纤维化发展方向的。与传统药物相比，CFX的优势在于，能通过调节获得免疫大鼠肺间质纤维化是一种难治性肺系疾病，研究肺间质纤维化的经典模型为博莱霉素诱导的大鼠或小鼠肺间质纤维化模型，该模型的病理变化基本符合肺间质纤维化的病理改变，因此被广泛采用。造模方法多以气管插管或气管切开后灌注BLM，使药物直接进入两肺为主。本课题组经过多个剂量76、5、342、1
mg/kg的实验，再结合大鼠肺组织病理变化和死亡率，发现通过BLM
mg/kg体质量气管插管快速灌注法可以成功复制大鼠肺间质纤维化模型，且死亡率低。
1材料与方法
11实验材料
11实验动物
清洁级健康雄性Wistar大鼠，体质量180200
g。由北京维通利华公司提供。左下肺钙化点或局部性纤维化患者性别男患者年龄该问题的相关标签：医生会员意见参考区许可证号：京动许字1999第039号。
12主要药品支，日本化药株式会社，批号为740140平阳星8
mg/支，天津太和制药有限公司，批号为050402。
13主要器材
18号套管针光源、纱布、35度倾斜鼠板、石蜡切片机德国、显微镜德国、OLYMPUS全自动显微摄像系统日本、K-70全自动高速冷冻离心机湘仪-TOMY、SPECOTRAT酶标比色仪SLT公司。
12实验方法
11溶液配制
BLM，用注射用生理盐水配成浓度为的溶液平阳星，用注射用生理盐水配成浓度为、的溶液。
12造模方法
大鼠腹腔注射10水合氯醛35
ml/kg体质量麻醉后仰面固定于35度倾斜鼠板上，将光源直接照射于大鼠咽喉部皮肤表面，左手垫纱布向外向上提起舌头，可见咽喉部有一明显的亮点。从大鼠口腔，右手水平插入18号套管针到达咽喉部时压低针尾，使针头抬高1530度角，轻轻插入气管，长度约套管针长度的3/4拔出针芯。将棉球薄片置于套管针外口，若棉球薄片随呼吸前后摆动，则说明套管针已经插入气管，若棉球薄片不随呼吸前后摆动，可能套管针误入食道，应立即拔出重新插入。向气管插管内快速注射BLM溶液，假手术组注射等体积生理盐水，并继续向气管内快速推注05
ml空气，立即将大鼠直立旋转，以使药液在双肺内分布均匀。动物清醒后随意进食。
13造模情况
第1次：BLM用注射用生理盐水配成浓度为溶液，造模剂量为15ml/kg体质量，即6
mg/kg体质量。共130只大鼠第2次：特发性肺纤维化平阳星用注射用生理盐水配成浓度为溶液，原拟分为76、5
mg/kg体质量等3个剂量组即10
ml/kg体质量，两肺局部纤维化怎么办?急!郭***提问：两肺局部纤维化怎么办?急!黄义鸿大夫回复：两肺局部纤维化怎么办?急!2#深圳市第二人民医院[我也要咨询][但由于实际操作中药物损失，最后1只药量不足，反推计算药量为34
mg/kg体质量形成7、6、534
mg/kg体质量等4组，各组大鼠数量分别为22、4、1只第3次：分为2个剂量组，肺间质纤维化2
mg/kg体质量剂量组，平阳星浓度为用量为05ml/kg体质量1
mg/kg体质量剂量组，平阳星浓度为用量为05
ml/kg体质量。每组各2只第4次：深入研究1
mg/kg体质量模型，平阳星浓度为用量为05
ml/kg体质量共44只。分为24h、72h、7d、14d、28
d共6个时间点，前3个时间点各5只，后3个时间点共29只，肺纤维化的治疗由于有死亡大鼠，14、28、45
d取材数量分别为8、8、9只。
14取材方法
10水合氯醛35
ml/kg体质量腹腔注射麻醉。麻醉后将大鼠仰卧固定于解剖台上，常规消毒切开皮肤，分离腹主动脉，用注射器采血，分离血清，置冰箱冻存，备用。打开胸腔取出肺脏，完整分离出气管和双肺，Lee等检索2007年2月以前的文献,收集使用囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)基因置换治疗肺囊性纤维化相关病变的随机对照研究并进行分析后发现,目前没有证据支持肺局部仔细去除周围结缔组织，经生理盐水洗涤后用滤纸吸干，电子天平称量肺湿质量，计算肺系数。右肺冻存制备组织匀浆液，左肺经大体观察后用10%福尔马林液固定。
血清转化生长因子1和血小板衍生生长因子检测
采用酶联免疫法测定血清中转化生长因子、血小板衍生生长因子的含量。试剂盒由尚柏生物医学技术北京有限公司提供。
16肺组织病理检查
左肺经10%福尔马林固定后取材，常规石蜡包埋，连续切片2张，分别做HE染色和Masson染色改良法，光镜下观察。
13统计学方法采用SPSS
110软件包进行统计学处理，实验数据用xs表示，两组间比较用t检验，检验水准为005。
2结果
21前期工作结果
第1次实验，24h内没有明显的异常反应，24
h后大鼠开始出现浑身颤抖，蜷缩成团，呼吸急促，口、鼻、眼睛出血，便血，爪甲紫绀，舌质紫暗等症状，部分大鼠急躁、挣脱鼠笼。2448
h内死亡14只，4872
h内死亡79只。肺纤维化的症状解剖部分大鼠，并做肺组织病理，发现两肺弥漫性充血肿胀，病理结果显示肺组织呈急性炎症反应，有透明膜形成。310
d内仍有大鼠陆续死亡，最后仅存活4只大鼠，生长状态良好，于44
d取材做肺组织病理，肺纤维化显示肺部有纤维化改变，但病变较轻。
第2次实验，24h内没有明显异常反应，24
h后开始有明显的蜷缩、嗜卧和出血第3天，7
mg/kg体质量组的2只大鼠全部死亡，6mg/kg与5
mg/kg组各死亡1只第4天，6mg/kg与5
mg/kg组各死亡1只第5天，5
mg/kg组死亡1只。对所有死亡大鼠进行解剖，均表现为全肺的肿胀、充血、出血。至第6天，本文报告一例臀部类表皮囊肿瘘感染后续发皮肤鳞癌,局部使用博来霉素发生肺纤维化致死。患者为76岁男性。30岁时左臀部出现肿物,至60岁时超过鸡蛋大,表皮呈紫分别对5
mg/kg组和34
mg/kg组存活下来的2只大鼠进行解剖时发现，5
mg/kg组大鼠的肺组织没有充血、出血、水肿等任何异常表现，可判定是正常的肺组织，推测造模有误，将其排除于5
mg/kg组之外34
mg/kg组大鼠肺组织也表现为全肺的肿胀、出血、充血，但程度较7、6、5
mg/kg组为轻。至此，以7、6、5mg/kg造模的大鼠在5
d内全部死亡，34
mg/kg组大鼠存活至第6天处死，肺部表现较其他剂量组略轻。
第3次实验，以2、1mg/kg体质量摸索，24
h内没有明显异常反应，24
h后大鼠均表现为蜷缩、嗜卧、颤抖、毛发耸立，其中1只1
mg/kg组大鼠眼睛出血较重，在第3天，出血状况好转并基本吸收，至第8天时，解剖表现为全肺的肿胀，弥漫的灶状出血和瘀斑，经过解剖1
mg/kg组2只大鼠和2
mg/kg组1只大鼠之后发现2个剂量组没有明显差别。为观察此2种剂量组大鼠是否会死亡，临时决定暂不处死另1只2
mg/kg组大鼠，于造模后28
d常规取材。病理结果显示2、1
mg/kg组，在造模第8天已经形成纤维化病灶。体质量造模结果
21整体状态
假手术组大鼠活泼好动，呼吸平稳，饮食如常，强壮肥硕，皮毛光亮润泽，体质量逐渐增加。博莱霉素造模组动物清醒后常规饲养，24
h内观察发现，动物除进食量、饮水量有所减少以及相对假手术组安静外无明显异常，2448
h内模型组进食量和饮水量较造模第1天均明显下降，精神不振，聚集成团，呼吸急促，身体抖动，毛发耸立若恶寒颤栗状，同时发现部分大鼠眼、鼻出血，大鼠趾甲可见血痂，舌质紫暗4872
h内发现模型组有1只大鼠眼鼻出血严重并伴腹泻，其余先前有眼鼻出血的大鼠均已减轻并基本吸收7296
h内模型组有2只大鼠死亡。动物进食饮水量在造模72
h后开始逐渐增加，但仍相对假手术组为少。模型组在造模后第10天和第20天各死亡1只。BLM造模大鼠的整体状态明显不如假手术组，基本状态在造模前7
d最重，此后逐渐恢复，体质量也逐渐增长。
22体质量
根据大鼠体质量进行随机分组，特发性间质性肺炎，双下肺有局部纤维化更多患者咨询特发性间质性肺炎特发性间质性肺炎能控制吗特发性间质性肺炎饮食吃什么好？特发性间经统计学检验，造模前各组大鼠体质量差异无统计学意义。假手术组大鼠体质量平稳上升。造模后第3、7、14天，模型组与假手术组比较体质量均显著下降P
23肺系数
造模第14天、28天和45天，模型组大鼠肺系数均显著高于假手术组P
大鼠体质量略表2
大鼠肺系数略
24血清TGF-1含量
第28天，模型组TGF-1水平高于假手术组P
25血清PDGF含量
第14、28天模型组PDGF高于假手术组，但差异无统计学意义第45天时模型组PDGF继续升高，显著高于假手术组P
大鼠血清TGF-1含量略
26大鼠肺组织病理变化
21
大体标本肉眼观察
